如何选择同型对照抗体？

一、什么是同型对照抗体?

同型对照(Isotype Control)指与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合而产生的背景信号。

二、为什么使用同型对照?

抗体在结构上都极其相似，大部分是恒定区，只有一小部分可变区不同，决定其与抗原的特异性结合。抗体分子结构的恒定区由保守区构成，在同型的抗体中其序列往往相同。

而抗体保守区是决定抗体作用机制的关键，其中的Fc region能参与调控并结合各类细胞上的Fc受体。所以同型对照(Isotype Control)可用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的假阳性干扰。同型对照也是阴性对照，其主要目的是确定一抗的结合是特异性的，而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。

三、同型对照用于哪些实验？

1.流式细胞实验

同型对照一直是流式细胞术中最常用的阴性对照之一。同型对照可模拟FcR或其他蛋白非特异性结合和染色，还可以用于设定流式细胞仪的电压，有效节约实验成本。

染色方式为：样本管：一抗+样本，同型对照管：同型对照+样本。

在以下情况中，实验人员必须使用同型对照确保流式实验的准确性：

● 实验人员流式经验较少

● 进行胞内蛋白流式实验，针对细胞内靶标的抗体即使不与抗原结合，也常常会出现被拦在细胞内。

● 实验不常见或特异性不高的抗体

2.免疫荧光和免疫组化，当同型对照的显色信号弱于特异性抗体，才能说明是抗体和样本中的目标蛋白结合。

3.IP（免疫沉淀）实验，下图的control IgG为同型对照，同型对照样本只能检测到抗体的重链条带，没有目的蛋白条带。

4.Elisa实验检测某种特异抗体时，可用同型对照排除非特异结合。

四、如何选择同型对照？

如果使用未标记一抗和标记二抗，那么同型对照需要选择和一抗相同来源，相同亚型的抗体，如果使用直接标记的一抗，那么同型对照还需要和一抗有相同的标记物。采用和一抗实验浓度相同的同型对照，以获得正确的结果分析。如果没有找到适合的同型对照，在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下，那么优先选择的顺序应该是亚链不同－－亚型不同——相同类别。比如，某种的抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型对照表里面找到不到完全相同的同型对照，那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а为同型对照。如果也没有找到Mouse IgG2а，那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照。如果最后还是没有找到Mouse IgG2b，那么选者相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。

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